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甘油二酯-DAG/DGELISA试剂盒参考价

日期:2020年05月24日 00:47:11 来源:T云

竞争法(competitive ELISA):样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。缺点:整体的敏感性和专一性都较差。

ELISA新技术——基于细胞法(cell-based ELISA):ELISA新技术——基于细胞法(cell-based ELISA)是一种新型的定性蛋白检测技术,是将细胞直接放在微孔板里培养,待检测时,不需要抽提蛋白和裂解细胞,便可以直接测量微孔板里蛋白经刺激或阻抑作用后的变化差异。优势:更方便,无需裂解细胞,所以目标蛋白损失最少,可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞;缺点:不能测定抗原量。 甘油二酯-DAG/DGELISA试剂盒参考价

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ELISA基本原理

①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最终结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:

①固相的抗原或抗体

②酶标记的抗原或抗体

③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。 甘油二酯-DAG/DGELISA试剂盒参考价

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注意事项1

⒈ 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

⒉ 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

⑴ 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

⑵ 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃、18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD(optical density-光密度)值。选择OD值比较大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

双抗体夹心法(sandwich ELISA):双抗体夹心法(sandwich ELISA)检测是被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化;缺点:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

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ELISA检测法分类:

直接法(direct ELISA):将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应;缺点:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。间接法(indirect ELISA):此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势:二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。缺点:交互反应发生的机率较高。 甘油二酯-DAG/DGELISA试剂盒参考价

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